多肽修飾服務
多肽修飾服務:
1. 胺基化 (amidation) 及乙醯化 (acetylation)
如果合成多肽為蛋白質的內部序列,採用 N 端乙醯化或 C 端胺基化可以去除多肽上的電荷,使其更趨向於蛋白質的自然結構,同時增強了多肽對抗外肽酶 (exopeptidases) 的抵抗力。
2. 生物素 (biotin) 及 FITC 標記
FITC 是螢光標記的活性前驅物。為了有效的標記 N 端,可在多肽的 N 端和螢光基團之間插入七原子的胺己苯酸酯間隔結構 (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH)。
3. 多種雙硫鍵 (disulfide bond) 修飾
在半胱胺酸殘基間製作雙硫鍵可以達到多肽環狀化,但由於雙硫鍵是隨機形成的,因此對於含多個半胱胺酸殘基的多肽來說,這是個挑戰。可在半胱胺酸指定的位置形成雙硫鍵,能實現一條多肽內導入三個雙硫鍵修飾。
4. 多種磷酸化 (phosphorylation)
多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對多肽和蛋白結構的影響以及蛋白激酶的作用機轉,已經成功地為客戶合成了大量的絲胺酸 (S:serine)、酥胺酸 (T:threonine) 和酪胺酸 (Y:tyrosine) 等磷酸化多肽。對於含有多個羥基胺基酸的多肽,可以透過交叉檢測或 Fmoc 檢測來選擇、確定多肽的磷酸化。
5. KLH, BSA,OVA 偶聯 (Conjugation)
多肽抗原由於分子太小而不易產生顯著的免疫反應,因此需要將多肽抗原偶聯到 BSA、OVA、KLH 等較大的蛋白載體上。KLH 由於在 ELISA 或 Western blotting 檢測中沒有抑制作用,不影響檢測結果。常用的偶聯原理是順丁烯二醯亞胺理論,即將多肽中的半胱胺酸 (cysteine) 殘基與載體蛋白偶聯。因此合成抗原多肽時,在其 N 端或 C 端添加一個半胱胺酸殘基有利於多肽與載體蛋白的偶聯。註:KLH 是一種很大的凝聚蛋白 (MW = 4*105 to 1*107),由於它特殊的大小及結構,在水中的溶解度不高,常常需要採取一些方法解決,但這並不影響免疫原性,免疫時常使用混合溶解的方法。在 C 端進行生物素標記時,常在其末端加上一個離胺酸 (lysine)殘基,生物素被連接到離胺酸側鏈,同時離胺酸的的正電荷也被去除。
6. 聚乙二醇修飾(PEGylation)
聚乙二醇修飾是將非離子的、無毒的、生物體不排斥的及高親水性的聚乙二醇聚合體,透過化學方法偶聯到大分子上(蛋白質、多肽等等)。聚乙二醇修飾的大分子由於溶解性(主要指疏水性藥物)及生物利用率的增高,寄主內最小免疫反應的抗原偽裝,腎清除率降低迴圈時間延長,從而提高了治療能力。
7. 同位素標記
為了進行核磁共振實驗,可將多肽標記穩定的非放射性的同位素。標記 2H、15N、13C、或 15 及 13 同時標記的多肽合成後便於檢測。CN
8. 複合抗原肽修飾
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生產高效價的抗多株抗體和多株疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以離胺酸的a-或e-基團形成主鏈,以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據離胺酸的數目,可以合成不同數目側鏈的多抗原肽,這樣不必將抗原偶聯到載體蛋白質便能產生高效價、高親和力的抗體。
交貨內容
多肽合成均受控於嚴格的品質控制。一般交付給客戶凍乾的多肽、純度報告(HPLC)、品質報告 (MASS) 以及相關的 QC 報告。
1. 胺基化 (amidation) 及乙醯化 (acetylation)
如果合成多肽為蛋白質的內部序列,採用 N 端乙醯化或 C 端胺基化可以去除多肽上的電荷,使其更趨向於蛋白質的自然結構,同時增強了多肽對抗外肽酶 (exopeptidases) 的抵抗力。
2. 生物素 (biotin) 及 FITC 標記
FITC 是螢光標記的活性前驅物。為了有效的標記 N 端,可在多肽的 N 端和螢光基團之間插入七原子的胺己苯酸酯間隔結構 (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH)。
3. 多種雙硫鍵 (disulfide bond) 修飾
在半胱胺酸殘基間製作雙硫鍵可以達到多肽環狀化,但由於雙硫鍵是隨機形成的,因此對於含多個半胱胺酸殘基的多肽來說,這是個挑戰。可在半胱胺酸指定的位置形成雙硫鍵,能實現一條多肽內導入三個雙硫鍵修飾。
4. 多種磷酸化 (phosphorylation)
多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對多肽和蛋白結構的影響以及蛋白激酶的作用機轉,已經成功地為客戶合成了大量的絲胺酸 (S:serine)、酥胺酸 (T:threonine) 和酪胺酸 (Y:tyrosine) 等磷酸化多肽。對於含有多個羥基胺基酸的多肽,可以透過交叉檢測或 Fmoc 檢測來選擇、確定多肽的磷酸化。
5. KLH, BSA,OVA 偶聯 (Conjugation)
多肽抗原由於分子太小而不易產生顯著的免疫反應,因此需要將多肽抗原偶聯到 BSA、OVA、KLH 等較大的蛋白載體上。KLH 由於在 ELISA 或 Western blotting 檢測中沒有抑制作用,不影響檢測結果。常用的偶聯原理是順丁烯二醯亞胺理論,即將多肽中的半胱胺酸 (cysteine) 殘基與載體蛋白偶聯。因此合成抗原多肽時,在其 N 端或 C 端添加一個半胱胺酸殘基有利於多肽與載體蛋白的偶聯。註:KLH 是一種很大的凝聚蛋白 (MW = 4*105 to 1*107),由於它特殊的大小及結構,在水中的溶解度不高,常常需要採取一些方法解決,但這並不影響免疫原性,免疫時常使用混合溶解的方法。在 C 端進行生物素標記時,常在其末端加上一個離胺酸 (lysine)殘基,生物素被連接到離胺酸側鏈,同時離胺酸的的正電荷也被去除。
6. 聚乙二醇修飾(PEGylation)
聚乙二醇修飾是將非離子的、無毒的、生物體不排斥的及高親水性的聚乙二醇聚合體,透過化學方法偶聯到大分子上(蛋白質、多肽等等)。聚乙二醇修飾的大分子由於溶解性(主要指疏水性藥物)及生物利用率的增高,寄主內最小免疫反應的抗原偽裝,腎清除率降低迴圈時間延長,從而提高了治療能力。
7. 同位素標記
為了進行核磁共振實驗,可將多肽標記穩定的非放射性的同位素。標記 2H、15N、13C、或 15 及 13 同時標記的多肽合成後便於檢測。CN
8. 複合抗原肽修飾
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生產高效價的抗多株抗體和多株疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以離胺酸的a-或e-基團形成主鏈,以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據離胺酸的數目,可以合成不同數目側鏈的多抗原肽,這樣不必將抗原偶聯到載體蛋白質便能產生高效價、高親和力的抗體。
交貨內容
多肽合成均受控於嚴格的品質控制。一般交付給客戶凍乾的多肽、純度報告(HPLC)、品質報告 (MASS) 以及相關的 QC 報告。