引子合成常見問題與解答 (FAQ)
Q-1. 合成的引子是什麼形態? |
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A-1.
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Q-2. 如何對合成 DNA/RNA 製品進行定量? |
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A-2.
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Q-3. 如何測定並計算OD值? |
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A-3.
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Q-4. 如何保存合成的引子? |
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A-4.
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Q-5. 引子在常溫下運輸,會降解嗎? |
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A-5.
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Q-6. 合成引子溶液在室溫下放置了數天,還可以使用嗎? |
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A-6.
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Q-7. 如何保存合成的螢光標記探針? |
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A-7.
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Q-8. 製品溶解後發現有少許沉澱,會影響實驗結果嗎? |
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A-8.
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Q-9. 測定製品的OD值後發現A260/A280<1.8,製品品質(純度)合格嗎? |
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A-9.
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Q-10. 能否根據電泳帶的亮度對合成的引子進行定量? |
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A-10.
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Q-11. 使用 3% 的 Agarose 凝膠電泳合成的引子,發現有很多條泳帶,為什麼? |
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A-11.
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Q-12. 進行PAGE電泳時,長度完全一樣的引子為什麼泳帶不在同一位置? |
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A-12.
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Q-13. 投訴定量不準是怎麼回事? |
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A-13.
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Q-14. 需要合成多少 OD 數? |
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A-14.
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Q-15. 如何檢測引子的純度? |
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A-15.
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Q-16. PCR產物經克隆後定序發現,引子處的鹼基有錯誤,為什麼? |
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A-16.
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Q-17. 引子是經過 PAGE 純化的,為什麼還有鹼基缺失或插入? |
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A-17.
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Q-18. 為什麼 OPC 或 PAGE 純化的引子,再用 HPLC 鑑定純度不高? |
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A-18.
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Q-19. 進行蛋白質表現實驗數個月不成功,經定序發現引子處有錯誤,怎麼辦? |
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A-19.
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Q-20. 引子不純會有什麼後果? |
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A-20.
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Q-21. 已經溶解的引子,為什麼原先使用正常,而過一段時間再使用就不好了? |
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A-21.
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Q-22. PCR 擴增不出就引子有問題嗎? |
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A-22.
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Q-23. PCR 擴增有很強的非專一性條帶,說明引子有污染嗎? |
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A-23.
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Q-24. 需要什麼級別的引子? |
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A-24.
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Q-25. 如何才能保證引子的正確性? |
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A-25.
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Q-26. 我們可以合成多長的引子? |
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A-26.
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Q-27. 為何長鏈引子收費要比短鏈引子高? |
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A-27.
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Q-28. 長鏈引子為什麼出錯的幾率非常高? |
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A-28.
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Q-29. DNA合成粗產物中含有什麼雜質? |
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A-29.
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Q-30. 一般合成的引子的 5’ 和3’ 末端有磷酸基團嗎? |
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A-30.
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Q-31. 平端的 PCR 產物難以克隆,為什麼? |
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A-31.
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Q-32. 合成的引子進行PCR 反應時無目的帶,怎麼辦? |
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A-32.
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Q-33. 進行反義核酸實驗時,是否要對DNA鏈全部進行S代修飾,除了S 代外,還有什麼辦法可增加核酸在生物體內的穩定性? |
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A-33.
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Q-34. Biotin 標記有三種,它們之間有何不同? |
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A-34.
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Q-35. FITC、6-FAM、5-FAM 標記之間有何區別? |
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A-35.
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Q-36. Quencher基團為 TAMRA 或 ECLIPSE 的雙標記螢光探針在使用上有什麼不同? |
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A-36.
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Q-37. 如何計算引子的 Tm 值? |
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A-37.
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Q-38. Primer 設計的基本原則是什麼? |
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A-38.
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Q-39. TaqMan 探針設計時應遵循原則? |
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A-39.
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Q-40. 引子(含修飾)的分子量是如何確定的? |
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A-40.
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Q-41. 最長可以合成多長的引子? |
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A-41.
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